蒂法与触手,亚洲乱亚洲乱妇,美女写真视频网

0

全部商品分類

首頁公司簡(jiǎn)介產(chǎn)品展示新聞資訊聯(lián)系我們試用申請(qǐng)

當(dāng)前位置: 首頁 > 新聞資訊 > 一種新型細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)方法的簡(jiǎn)要介紹

一種新型細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)方法的簡(jiǎn)要介紹
koster / 2019-03-04

一種新型細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)方法的簡(jiǎn)要介紹

廣州科適特科學(xué)儀器有限公司

一.傳統(tǒng)細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)技術(shù)—?jiǎng)澓蹖?shí)驗(yàn)
1.基本原理
細(xì)胞劃痕（修復(fù)）法是簡(jiǎn)捷測(cè)定細(xì)胞遷移運(yùn)動(dòng)與修復(fù)能力的方法，類似體外傷口愈合模型恭隧，在體外培養(yǎng)皿或平板培養(yǎng)的單層貼壁細(xì)胞上祈哆，用微量槍頭或其它硬物在細(xì)胞生長(zhǎng)的中央?yún)^(qū)域劃線漩跋，去除中央部分的細(xì)胞，然后繼續(xù)培養(yǎng)細(xì)胞至實(shí)驗(yàn)設(shè)定的時(shí)間（例如72h）帆速，取出細(xì)胞培養(yǎng)板阁檀，觀察周邊細(xì)胞是否生長(zhǎng)（修復(fù)）至中央劃痕區(qū)，以此判斷細(xì)胞的生長(zhǎng)遷移能力互愚，實(shí)驗(yàn)通常需設(shè)定正常對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組羞喻，實(shí)驗(yàn)組是加了某種處理因素或藥物、外源性基因等的組別千覆，通過不同分組之間的細(xì)胞對(duì)于劃痕區(qū)的修復(fù)能力区膨，可以判斷各組細(xì)胞的遷移與修復(fù)能力。

實(shí)驗(yàn)材料	細(xì)胞樣品
試劑姑裂、試劑盒	無血清培養(yǎng)基 PBS
儀器馋袜、耗材	6孔板 maker筆直尺槍頭
實(shí)驗(yàn)步驟	準(zhǔn)備：所有能滅菌的器械都要滅菌，直尺和marker筆等在操作前舶斧，需紫外照射30min（超凈臺(tái)內(nèi)）流程 1.先用marker筆在6孔板背后桃焕，用直尺比著，均勻得劃?rùn)M線捧毛，大約每隔0.5-1cm一道观堂，橫穿過孔。每孔至少穿過5條線呀忧。 2.在空中加入約5X10⁵個(gè)細(xì)胞师痕，具體數(shù)量因細(xì)胞不同而不同，掌握為過夜能鋪滿而账。 3.第二天用槍頭比著直尺胰坟，盡量垂至于背后的橫線劃痕，槍頭要垂直泞辐，不能傾斜笔横。 4.用PBS洗細(xì)胞3次，去處劃下的細(xì)胞咐吼，加入無血清培養(yǎng)基要茴。 5.放入37度5%CO₂培養(yǎng)箱，培養(yǎng)搔献。按0携侮，6，12榛瞪，24小時(shí)取樣姚继，拍照。

2、操作步驟
（1）先用marker筆在6孔板背后几馁，用直尺比著某尘，均勻的劃?rùn)M線，大約每隔0.5~1cm一道钙阐，橫穿過孔厦鸠。每孔至少穿過5條線。
（2）在孔中加入約5×105個(gè)細(xì)胞课丢，具體數(shù)量因細(xì)胞種類不同而不同蛆存，接種原則為過夜后融合率達(dá)到100%。
（3）第二天用槍頭比著直尺响禽，盡量垂至于背后的橫線劃痕徒爹，槍頭要垂直，不能傾斜(不同孔之間最好使用同一只槍頭)芋类。
（4）PBS洗細(xì)胞3次隆嗅，去處劃下的細(xì)胞，加入無血清培養(yǎng)基侯繁。
（5）放入37℃ 5% CO2培養(yǎng)箱胖喳，培養(yǎng)≈梗可按0丽焊，6，12咕别，24h時(shí)間點(diǎn)取樣技健，拍照(具體時(shí)間依實(shí)驗(yàn)需要而定)。
（6）統(tǒng)計(jì)方法：使用Image J軟件打開圖片后惰拱，隨機(jī)劃取6至8條水平線雌贱，計(jì)算細(xì)胞間距離的均值。

3.注意事項(xiàng)：
（1）在用PBS緩沖液沖洗時(shí)搜栽，貼壁慢慢加入爸桨，以免沖散單層貼壁細(xì)胞，影響實(shí)驗(yàn)拍照結(jié)果贱供。
（2）一般做劃痕實(shí)驗(yàn)评梁，都是無血清或者低血清（<2%）否則細(xì)胞增殖就不能忽略。
（3）按照6孔板背后畫線的垂直方向劃痕，可以形成若干交叉點(diǎn)给急，作為固定的檢測(cè)點(diǎn)，以解決了前后觀察時(shí)位置不固定的問題。
二．傳統(tǒng)實(shí)驗(yàn)方法主要問題
傳統(tǒng)實(shí)驗(yàn)方法缺點(diǎn)是細(xì)胞增殖對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果有影響英上，即使在無血清或低血清條件時(shí)韩脏，細(xì)胞的狀
態(tài)、代謝等方面會(huì)受到影響，由于細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)系統(tǒng)整體性的下調(diào)价秉，細(xì)胞遷移的速度也會(huì)
慢很多；另外創(chuàng)建“傷口”也可能時(shí)大時(shí)小暮态，邊緣不整齊等誤差鹦赎；還有在鏡下拍照觀察時(shí)，
每次觀察點(diǎn)基本不可能做到完全一致等误堡。

三．最新實(shí)驗(yàn)解決方法-------傷口愈合劃痕插件

可黏附底部古话；生物相容硅膠材料；9 mm x 9 mm x 5 mm锁施；兩孔（70μl/孔）陪踩；每孔生長(zhǎng)面積0.22 cm2；可產(chǎn)生500 μm寬的“gap”

特點(diǎn)：
1. 在一定程度上模擬了體內(nèi)細(xì)胞遷移的過程悉抵。
2. 非常適合研究細(xì)胞與胞外基質(zhì)（ECM）肩狂，細(xì)胞與細(xì)胞之間相互作用引起的細(xì)胞遷移。
3. 與包括活細(xì)胞成像在內(nèi)的顯微鏡系統(tǒng)兼容姥饰，可用于分析細(xì)胞間的相互作用傻谁。
4. 研究細(xì)胞遷移的體外實(shí)驗(yàn)中最簡(jiǎn)單的方法。

細(xì)胞培養(yǎng)插件方法與傳統(tǒng)劃痕實(shí)驗(yàn)比較
細(xì)胞培養(yǎng)插件提供重復(fù)性更好的實(shí)驗(yàn)結(jié)果：
左圖是傷口愈合插件做出的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)列粪；右圖是槍頭劃痕做出的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)

四.方案小結(jié)
（1）新型細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)方法可以保證劃痕的標(biāo)準(zhǔn)化审磁，保證了實(shí)驗(yàn)的重復(fù)性－對(duì)比槍頭劃痕，劃痕會(huì)歪歪扭扭岂座，無法保證每次都一樣态蒂；
（2）新型細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)方法可以避免槍頭劃痕會(huì)傷到包被；手動(dòng)劃痕傷到包被的話厘乱，會(huì)直接影響了細(xì)胞遷移的結(jié)果雅跺；
（3）直接鏡檢觀察，成像效果良好潭女；
（4）新型細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)方法有配套的圖像分析枕篡，圖像分析是通過計(jì)算實(shí)驗(yàn)區(qū)域的空白面積來計(jì)算愈合情況的，比分析計(jì)算的要更客觀準(zhǔn)確捍秃；
（5）產(chǎn)品用法簡(jiǎn)介：只需要在插件的兩個(gè)孔里種細(xì)胞生香，等細(xì)胞貼壁了再拔掉這個(gè)插件，細(xì)胞之間就會(huì)留下一道標(biāo)準(zhǔn)的劃痕印洒，就可以開始定時(shí)觀察細(xì)胞愈合的情況了藐病；
（6）多種規(guī)格適合不同的實(shí)驗(yàn)流程，2孔瞒谱，3孔赏庙，4孔栋昙，帶培養(yǎng)皿或者插件，細(xì)胞追蹤實(shí)驗(yàn)專用插件培養(yǎng)皿等

下一篇:如何高效進(jìn)行免疫熒光染色鸯乃？
上一篇:廣州科適特科學(xué)儀器有限公司獲德國(guó)ibidi正式簽約代理授權(quán)

用戶評(píng)論(共0條評(píng)論)

暫時(shí)還沒有任何用戶評(píng)論

用戶名：	匿名用戶
E-mail：
評(píng)價(jià)等級(jí)：
評(píng)論內(nèi)容：
驗(yàn)證碼：

国内偷自视频区视频综合,日韩超清一区二区不卡视频,日韩福利微拍在线播放视频免费,日韩网红美女主播自拍视频网站

瀏覽歷史

用戶評(píng)論(共0條評(píng)論)