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一體化細(xì)胞免疫熒光技術(shù)介紹
 
免疫熒光技術(shù)（Immunofluorescence technique）又稱熒光抗體技術(shù)磕潮，是標(biāo)記免疫技術(shù)中發(fā)展最早的一種效床。它是在免疫學(xué)候引、生物化學(xué)和顯微鏡技術(shù)的基礎(chǔ)上建立起來的一項(xiàng)技術(shù)们童。很早以來就有一些學(xué)者試圖將抗體分子與一些示蹤物質(zhì)結(jié)合畔况，利用抗原抗體反應(yīng)進(jìn)行組織或細(xì)胞內(nèi)抗原物質(zhì)的定位。
一．傳統(tǒng)的免疫熒光實(shí)驗(yàn)步驟
（一）慧库、實(shí)驗(yàn)材料 
1. 細(xì)胞樣品 
2. 試劑跷跪、試劑盒： 多聚甲Quan馋嗜；70% 甲醇；丙Tong吵瞻；PBS葛菇；Triton ；BSA橡羞；DAPI 染液眯停；DABCO；Tris卿泽；甘油   
3. 儀器莺债、耗材：玻片     
（二）、實(shí)驗(yàn)步驟     
細(xì)胞爬片免疫熒光實(shí)驗(yàn)步驟 
第一天：
1. 在培養(yǎng)板中將已爬好細(xì)胞的玻片用 PBS 浸洗 3 次挨究，每次 3 min讼石；
2. 用 4% 的多聚甲Quan固定爬片 15 min， PBS 浸洗玻片 3 次韵慷，每次 3 min回乞；
3. 0.5%Triton X-100( PBS 配制 ) 室溫通透 20 min（細(xì)胞膜上表達(dá)的抗原省略此步驟）；
4. PBS 浸洗玻片 3 次历劣，每次 3 min冷沿，吸水紙吸干 PBS佣深，在玻片上滴加正常山羊血清根丈，室溫封閉 30 min；
5. 吸水紙吸掉封閉液吉蔬，不洗抹寿，每張玻片滴加足夠量的稀釋好的一抗并放入濕盒，4℃ 孵育過夜敏握；
第二天：
6. 加熒光二抗： PBST 浸洗爬片 3 次馆寇，每次 3 min，吸水紙吸干爬片上多余液體后滴加稀釋好的熒光二抗泼舱，濕盒中 20-37℃ 孵育 1 h等缀，PBST 浸洗切片 3 次，每次 3 min娇昙；注意：從加熒光二抗起尺迂，后面所有操作步驟都盡量在較暗處進(jìn)行。
7. 復(fù)染核：滴加 DAPI 避光孵育 5 min冒掌，對(duì)標(biāo)本進(jìn)行染核噪裕，PBST 5 min×4 次洗去多余的 DAPI；
8. 用吸水紙吸干爬片上的液體股毫，用含抗熒光淬滅劑的封片液封片膳音，然后在熒光顯微鏡下觀察采集圖像

二 傳統(tǒng)免疫熒光實(shí)驗(yàn)主要問題

1. 爬片效果欠佳
2. 細(xì)胞和試劑用量大召衔，成本高
3. 染液分布不均
4. 操作繁瑣,費(fèi)時(shí)費(fèi)力

三. 一體化免疫熒光技術(shù)簡(jiǎn)介 
一體化的培養(yǎng)室-固定-染色-成像 免疫熒光的解決方案

技術(shù)特點(diǎn)：
1.快速簡(jiǎn)便的樣品制備,一體化培養(yǎng)室簡(jiǎn)化了免疫熒光染色方案
2.均勻細(xì)胞分布,通道載玻片幾何結(jié)構(gòu)可以產(chǎn)生均勻的細(xì)胞分布
3.經(jīng)濟(jì)實(shí)惠的實(shí)驗(yàn)方案，需要少量的細(xì)胞和試劑
4.高分辨率成像祭陷，適用于寬場(chǎng)熒光苍凛，共焦成像，F(xiàn)RAP-FRET-FLIM和高質(zhì)量的相差成像（Phase Contrast）
 
主要工作模式：
1. 通道模式：ibidi通道載玻片是使用少量試劑的理想選擇颗胡。μ-Slides VI0.4是一般免疫熒光檢測(cè)的理想選擇毫深，而μ-Slide I0.4Luer可在低密度培養(yǎng)和流動(dòng)實(shí)驗(yàn)中進(jìn)行免疫熒光染色。

2.開放腔室模式
Ibidi μ-Slide 8 孔和μ-Dish35mm 能夠在全內(nèi)腔中實(shí)現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)免疫熒光方案缩毯，無蓋玻片径以。染色后，使用高分辨率顯微鏡通過聚合物蓋玻片底部觀察樣品察遇。

 

3. 可拆卸腔室載玻片模式
帶有腔室的可拆卸硅墊片為個(gè)體細(xì)胞培養(yǎng)和孵育提供了理想的模式夺疹。ibidi micro-Insert 4 Well可以使用極低的試劑量”橹浚可拆卸3Well|8Well|12 Well Chambers是長(zhǎng)期樣品儲(chǔ)存的理想選擇应康。

1. 一體化免疫熒光技術(shù)應(yīng)用舉例

1. Human umbilical vein endothelial cells (HUVEC) cultured under flow conditions in μ-Slide I ^0.4 Luer

3. Differentiated mouse fibroblasts cultured on elastic surface (ESS 28 kPa)

綠色: zyxin (Alexa 488 conjugated antibody)
紅色: alpha-smooth muscle actin (Cy5 conjugated antibody)